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流式細胞術細胞活性氧檢測

發(fā)布時間:2025-09-18

關鍵詞:流式細胞術細胞活性氧測試周期,流式細胞術細胞活性氧測試方法,流式細胞術細胞活性氧測試標準

瀏覽次數: 5

來源:北京中科光析科學技術研究所

文章簡介:

流式細胞術細胞活性氧檢測是一種基于熒光探針的技術,用于定量分析細胞內活性氧物種水平。該方法涉及細胞樣本制備、特異性探針染色、流式細胞儀分析等關鍵步驟,重點包括探針選擇、染色條件優(yōu)化、儀器校準和數據解讀,確保檢測結果的準確性和可靠性。
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因業(yè)務調整,部分個人測試暫不接受委托,望見諒。

檢測項目

細胞樣本制備:通過離心、洗滌步驟去除雜質,確保細胞活性和一致性,為后續(xù)熒光染色提供高質量單細胞懸液,避免檢測干擾。

熒光探針選擇:根據活性氧物種類型選擇合適的熒光探針,如DCFH-DA用于總ROS檢測,確保探針特異性和靈敏度,提高檢測準確性。

染色條件優(yōu)化:優(yōu)化探針濃度、孵育時間和溫度參數,最大化熒光信號強度而不引起細胞毒性,保證染色效果穩(wěn)定可靠。

流式細胞儀校準:使用標準熒光微球進行儀器校準,調整激光功率和檢測器電壓,確保熒光信號的準確測量和重復性。

數據采集設置:設置適當的電壓、補償和閾值參數,避免細胞碎片和背景噪聲干擾,提高ROS檢測的信噪比和數據質量。

ROS水平定量:通過分析熒光強度分布,計算細胞內活性氧的相對或絕對水平,提供氧化應激狀態(tài)的定量評估。

細胞活力評估:結合活性染料如碘化丙啶區(qū)分活細胞和死細胞,確保ROS檢測僅在活細胞中進行,避免假陽性結果。

多參數分析:同時檢測活性氧和其他細胞參數如細胞周期或凋亡標志物,提供更全面的細胞狀態(tài)信息。

質量控制:包括陰性對照和陽性對照樣本,驗證檢測系統的可靠性和一致性,確保結果可重復。

數據解讀:使用正規(guī)軟件分析熒光數據,生成直方圖或散點圖,解讀ROS水平變化及其生物學意義。

檢測范圍

哺乳動物細胞系:如常見腫瘤細胞或正常細胞系,用于研究疾病模型中氧化應激機制和藥物效應,提供體外實驗基礎。

原代細胞:從組織分離的細胞如肝細胞或神經元,反映更生理相關的活性氧水平,用于轉化醫(yī)學研究。

血液樣本:全血或分離的白細胞樣本,用于臨床檢測炎癥、免疫反應或血液疾病中的ROS變化。

植物細胞:如模式植物細胞系,研究植物應激響應和抗氧化機制,應用于農業(yè)生物技術領域。

微生物樣本:細菌或酵母細胞,用于抗菌研究或環(huán)境應激評估,監(jiān)測微生物氧化狀態(tài)。

腫瘤細胞樣本:癌癥細胞系用于評估化療或放療誘導的ROS產生,支持癌癥治療研究。

干細胞樣本:多能干細胞或間充質干細胞,研究分化過程中氧化應激的作用,應用于再生醫(yī)學。

組織衍生細胞:通過酶消化從組織切片制備的單細胞懸液,用于組織水平ROS檢測,反映整體應激狀態(tài)。

環(huán)境生物樣本:如水或土壤中的微生物群落,監(jiān)測環(huán)境污染引起的氧化應激效應,應用于生態(tài)毒理學。

藥物篩選樣本:高通量篩選化合物對細胞ROS水平的影響,用于藥物開發(fā)和安全評估。

檢測標準

ASTM E2520-2015《流式細胞術用于細胞活性測定的標準指南》:提供了流式細胞術在細胞活性檢測中的一般原則和方法,包括樣本處理和數據分析要求。

ISO 20391-1:2018《生物技術-細胞計數-第1部分:細胞計數方法的一般要求》:規(guī)定了細胞計數和活力評估的標準程序,確保檢測一致性和可比性。

GB/T 37882-2019《流式細胞術檢測細胞活性氧的方法》:中國國家標準,詳細描述了ROS檢測的樣本制備、探針使用和儀器操作規(guī)范。

ISO 10993-5:2009《醫(yī)療器械生物學評價-第5部分:體外細胞毒性試驗》:涉及細胞應激檢測部分,包括ROS評估在安全性測試中的應用。

ASTM F2315-2018《細胞活性評估的標準測試方法》:涵蓋熒光基法檢測細胞活性相關參數,包括氧化應激指標。

檢測儀器

流式細胞儀:用于分析細胞熒光特性,通過激光激發(fā)熒光探針并檢測散射光和熒光信號,實現ROS水平的快速定量分析。

細胞培養(yǎng)箱:提供恒溫恒濕和CO2控制環(huán)境,用于細胞培養(yǎng)和染色前的孵育步驟,確保細胞狀態(tài)穩(wěn)定。

高速離心機:用于細胞樣本的離心分離,去除上清液并制備均勻細胞懸液,支持樣本預處理需求。

熒光顯微鏡:可選用于可視化熒光染色初步驗證,觀察細胞形態(tài)和熒光分布,輔助流式檢測 setup。

酶標儀:用于批量熒光強度測量,提供高通量篩查選項,但流式細胞術提供更高單細胞分辨率

檢測報告作用

銷售報告:出具正規(guī)第三方檢測報告讓客戶更加信賴自己的產品質量,讓自己的產品更具有說服力。

研發(fā)使用:擁有優(yōu)秀的檢測工程師和先進的測試設備,可降低了研發(fā)成本,節(jié)約時間。

司法服務:協助相關部門檢測產品,進行科研實驗,為相關部門提供科學、公正、準確的檢測數據。

大學論文:科研數據使用。

投標:檢測周期短,同時所花費的費用較低。

準確性高;工業(yè)問題診斷:較約定時間內檢測出產品問題點,以達到盡快止損的目的。

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